患病者的t细胞代谢是否与索拉非尼(sorafenib)、甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib)片反应相关-

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所属分类:疗效
摘要

为了了解异基因免疫反应和索拉非尼之间是否存在功能协同作用,我们使用了依赖混合系-白血病-部分串联重复MLL(PTD/wt)和FLT3(ITD/wt)-突变的小鼠

  为了了解异基因免疫反应和索拉非尼(sorafenib)之间是否存在功能协同作用,我们使用了依赖混合系-白血病-部分串联重复MLL(PTD/wt)和FLT3(ITD/wt)-突变的小鼠白血病模型。照射/异源hct后注入白血病细胞,异源hct后第2天注入供者来源t细胞,类似于患病者应用的供者淋巴细胞灌注(DLI)。我们只在接受索拉非尼(sorafenib)和t细胞的小鼠中观察到长期的白血病控制。索拉非尼(sorafenib)单独使用时无保护作用。在小鼠淋巴细胞白血病(Ba/F3-ITD)模型中观察到类似的白血病对照模式和LUC+-/GFP+-白血病细胞的扩增。通过微阵列分析Ba/F3-ITD细胞,体外索拉非尼(sorafenib)暴露后,白细胞介素-15(Il-15)mRNA表达上调,qPCR和流式细胞术证实了这一结果。IL-15的产生依赖于索拉非尼(sorafenib)敏感性,表达抗索拉非尼(sorafenib)flt3-itdf691l突变体的Ba/f3细胞中IL-15的表达没有延长。

  接受t细胞和索拉非尼(sorafenib)的小鼠血清中IL-15上升。白血病细胞降低时,索拉非尼(sorafenib)诱导的血清IL-15消退。不同小鼠髓系白血病模型(FLT3-ITD转染BM、髓系WEHI-3BFLT3-ITD细胞系,一种依赖混合系-白血病-部分串联重复MLL(PTD/wt)和FLT3(ITD/wt)-突变的遗传性AML模型13)中,在FLT3-ITD抑制后,IL-15血清水平上升。索拉非尼(sorafenib)对体外t细胞活化无影响(fig.1e-h)。白血病细胞表达IL-15受体(R)血清素(suppl.1i,j),这是IL-15转表达的必要要素。

  在flt3-itd驱动的白血病细胞中,IL-15基因缺陷使索拉非尼(sorafenib)的有益作用失效,而受体的IL-15基因缺陷则没有。外源性IL-15能够挽救白血病细胞中IL-15的缺失(Fig.2b),但由于移植物抗宿主病(GVHD)更严重,致命率延长(Fig.2a),而在索拉非尼(sorafenib)处置的小鼠中没有观察到这种情况(Fig.2c)。这些数据表明,白血病细胞在索拉非尼(sorafenib)暴露时产生的IL-15水平低于驱动gvhd反应的阈值。

  基于抗体的IL-15缺失或il-15r缺陷t细胞的转移扩散导致索拉非尼(sorafenib)医治后白血病控制损失。索拉非尼(sorafenib)/t细胞联合应用改善了三种人源性AML模型的生存,这些模型使用了人原发的AMLFLT3-ITD细胞、MV4-11(AMLFLT3-ITDcell系)或MOLM-13(AMLFLT3-ITDcell系)细胞。

  与对照剂相比,在接受索拉非尼(sorafenib)医治的allo-HCT受体中,供体CD8+t细胞显示了更高的抗癌细胞毒性marker15CD107a、IFN-小鼠血清和CD40L的表达。与载体相比,IL-15延长了体外CD8+CD107a+t细胞的频率。il-15r的激活导致stat5磷酸化,索拉非尼(sorafenib)处置小鼠的CD8+t细胞中发现更高的phospho-stat5水平。CD8+t细胞移植物的缺失而nk细胞的缺失导致索拉非尼(sorafenib)的保护作用丧失,表明CD8+t细胞介导了索拉非尼(sorafenib)诱导的抗癌作用。

  为了了解索拉非尼(sorafenib)医治后是否会产生记忆免疫,我们下一步从接受Ba/f3-itd-白血病+t细胞+载体或Ba/f3-itd-白血病+t细胞+索拉非尼(sorafenib)医治的小鼠中分离出CD8+H-2Kb+t细胞。CD8+H-2Kb+t细胞从接受过Ba/f3-itd-白血病、t细胞和索拉非尼(sorafenib)的同种异体hct受体中分离出来,但不同的细胞群来自于培养基或索拉非尼(sorafenib)+il-15医治的小鼠,能够长期控制次级Ba/f3-itd-白血病细胞。索拉非尼(sorafenib)处置的受体供体t细胞表现出长寿的特点,包括高bcl-2表达和pd-1表达降低。

  从索拉非尼(sorafenib)医治的Ba/f3-itt-白血病受体中分离出的t细胞没有控制第三方wehi-3b细胞,这反映了reco-免疫应答的靶点特异性。体外索拉非尼(sorafenib)暴露后,在flt3-itt阴性的白血病细胞系中未见IL-15产生,而flt3-itt阴性的wehi-3b细胞不能诱导记忆免疫。

  干扰素调节因子-7(IRF7)是IL-15转录的重要上游激活因子。激活转录因子-4(ATF4)能够抑制irf7的磷酸化和激活21,从而抑制IL-15的转录。在小鼠和人flt3-itd驱动的白血病细胞中,我们观察到索拉非尼(sorafenib)暴露后Atf4mRNA和蛋白的减少(Fig.4a,b,suppl.4a-c),但在索拉非尼(sorafenib)耐受药物或flt3-itd阴性的白血病细胞中没有减少(Suppl.Fig.4d-f)。与ATF4负调控减少一致的是,在小鼠和人白血病细胞中,索拉非尼(sorafenib)医治后活性IRF7(pIRF7/tIRF7)的数量延长(fig.c4-e,suppl.4g),而在索拉非尼(sorafenib)耐受药物的白血病细胞中活性IRF7(pIRF7/tIRF7)没有延长(suppl.4h)。索拉非尼(sorafenib)医治后il-15产生延长、irf7激活、生存增加、外周血白血病细胞计数降低,atf4过表达则消失。

  irf7敲低(supply.fig.4m)导致索拉非尼(sorafenib)医治后人amlflt3-itd细胞il-15产生水平减少,增加生存期损失(Fig.4h,i)。对人amlflt3-itt细胞的激酶组分析和随后的激酶抑制显示索拉非尼(sorafenib)对IL-15的产生具有选择性。索拉非尼(sorafe
患病者的t细胞代谢是否与索拉非尼(sorafenib)、甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib)片反应相关-
nib)(甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib)片)结合物分析未发现其他与il-15生产直接相关的激酶。基于这些观察结果,我们提出了索拉非尼(sorafenib)通过抑制在FLT3-ITD+AML中ATF4的负调控功能而延长IL-15的产生从而导致irf7激活的机制(Fig.4j)。

  与索拉非尼(sorafenib)相似,其他flt3抑制剂延长了IL-15的产量。与我们在小鼠白血病细胞中的研究结果一致,我们观察到体外索拉非尼(sorafenib)暴露延长了人原发性FLT3-ITD+AML细胞的IL-15mRNA,但在FLT3-ITDnegativeAML细胞中没有延长。

  此外,索拉非尼(sorafenib)医治后,FLT3-ITD+AML患病者血清IL-15水平、白血病细胞BM中IL-15/pIRF7蛋白和IL-15mRNA水平均上升,随白血病负担减轻而下降。我们区别分析有反应者(索拉非尼(sorafenib)/dli医治后血液学完全缓解)和无反应者(无完全缓解)。无应答者中未见IL-15/pirf7上升,其他细胞因子未见上升。在DLI/索拉非尼(sorafenib)应答者中发现IFN-血清水平上升和IFN-40,000+CD8+t细胞频率。此外,穿孔素+CD8+t细胞在DLI/索拉非尼(sorafenib)应答者中延长,但在无应答者中没有延长。

  人原发性FLT3-ITD+AML细胞的全基因组测序显示不同的体细胞突变频率和拷贝数变化,与响应者/非响应者组无关。在几个无反应者中检查到flt3抑制剂抗性突变(D839G-FLT3,D835Y-FLT322),但在所有有反应者中均未检查到。注释所有的突变在给定距离在转录起始的Interferon-regulatory-factor(IRF)基因的chromatin-state单核细胞,我们发现降低的数量遗传突变为Tx(强大的转录)和TxW转录(弱)网站在IRF7的amlDLI/索拉非尼(sorafenib)-non-responders相比DLI/索拉非尼(sorafenib)-responders(Fig.6e)。索拉非尼(sorafenib)(甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib)片)医治后,只有应答者的IL-15mrna表达上调。

  线粒体空闲呼吸能力(SRC)和糖酵解能力(GC)被认为与增加t细胞存活和增强对抗原挑战的反应能力有关。为了了解患病者的t细胞代谢是否与索拉非尼(sorafenib)反应相关,我们通过测量基线和线粒体适应度测试23时的耗氧率(OCR)和细胞外酸化率(ECAR)来确定其CD8+t细胞的代谢谱。DLI/索拉非尼(sorafenib)(甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib)片)应答者患病者在索拉非尼(sorafenib)医治后GC和SRC均显著增强。相比之下,DLI/索拉非尼(sorafenib)(甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib)片)-无反应者的代谢状况未见变化。索拉菲尼怎么选购?详情请扫码咨询:

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