索拉非尼(sorafenib)、多吉美(tosylate)和其他药品联合杀死癌细胞-

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摘要

索拉非尼和伏立诺司他互相作用杀死胰腺癌细胞。这种药品联合与胰腺癌医治性吉西他滨互相作用,导致更大阶段的肿瘤细胞去世。与我们先前在肝癌细胞中的数据不同,becli

  索拉非尼(sorafenib)和伏立诺司他互相作用杀死胰腺癌细胞。这种药品联合与胰腺癌医治性吉西他滨互相作用,导致更大阶段的肿瘤细胞去世。与我们先前在肝癌细胞中的数据不同,beclin1或atg5减少[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]致命性。基于我们的细胞杀伤数据,我们接下来探讨了药品暴露后细胞存活和自噬调节蛋白的功能或表达是否发生了变化。[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]处置胰腺癌细胞可迅速减少bcl-xl和mcl-1的表达,并增强beclin1的表达。同时,mtorc1(s2448)和mtorc2(s2481)的磷酸化阶段减少,eif2s51的磷酸化阶段延长。我们组的多项研究已经证明使用分子工具减少eif2功能是导致bcl-xl和mcl-1水平迅速减少和beclin1表达延长的原理。与beclin1失活和表达延长相一致,在[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]暴露后4h,gfp+自噬体的数量延长。接触后8小时,rfp+囊泡数量延长,表明自溶体形成,而gfp+囊泡数量下降。这些数据表明,自噬通量的发生。

  细胞内-catenin的表达受“-catenindestructioncomplex”的形成调节,其中-catenin最终通过蛋白酶体被泛素化并降解。为了进行降解,-连环素也必须被糖原合成酶激酶(gsk3)磷酸化。Gsk3被akt磷酸化,这导致gsk3失活,在胰岛素讯号传导的情况下,导致糖原合成酶活性的延长。我们之前已经注意到,在动物饥饿和给予胰岛素和普萘洛尔后,胰岛素能够调节兔骨骼肌中gsk3的活性(未发表的数据)。用[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]处置胰腺癌细胞减少了-in的表达,frizzled,erbb1和k-ras,并且联用能够减少aktt308,akts473和g3s9/s21的磷酸化。Hdac表达的变化和其他蛋白水平的变化与k-ras表达降低和eif2s51磷酸化增强相关。Gsk3的去磷酸化和活化与-catenin的表达降低有关。低水平的-catenin,erbb1和k-ras能够预测肿瘤生长和存活率的减少。[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]医治panc1和miapaca2人胰腺癌细胞可显著减少pd-l1、odc和ido-1的表达。联合使用药显著增强了mhca的表达。细胞暴露于吉西他滨引发起了生物标志物表达的类似变化,除了吉西他滨延长了ido-1的表达。Ido-1表达的上升预示着免疫反应的减弱。在pan02鼠胰腺癌细胞系中也获得了类似的数据。

  [索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]对小鼠胰腺癌细胞的医治也显著减少了多种hdac蛋白的表达。Beclin1或atg5的降解阻止了hdac蛋白水平的减少,正如我们之前注意到的其他药品组合。然而,hdacs1-3的降解不是被beclin1的降解阻断,而是被atg5的降解阻断。基于图5(a)中的数据,我们进行了研究,将hdac表达的变化与免疫医治生物标志物表达的变化联系起来。[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]延长了atg5、beclin1和mhca的表达,并减少了erbb1、ido-1、pd-l1、pd-l2、mcl-1、odc和bcl-xl的表达。Hdac2或hdac3基因敲除的现象概括了药品暴露对atg5、beclin1、pd-l1、pd-l2、mcl-1、mhca、odc和bcl-xl表达的影响。Hdac1基因敲除减少了erbb1和pd-l1的表达。因此,[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]调节胰腺癌细胞活力和免疫原性的部分分子机制很可能是通过抑制和降低组蛋白脱乙酰酶蛋白的表达。

  我们接下来进行动物实验,以证明或驳斥体外观察到的生物标志物变化,是否与体内抗癌免疫医治反应的提高有关。肿瘤生长抑制指数为(1-(医治肿瘤平均体积)/(对照肿瘤平均体积)x100%。抗pd-1抗体的输注对pan02肿瘤的生长没有明显影响,与vehicle+anti-pd-1的804%相比,vehicle+igg的24天延长了849%。三天暴露于[索拉非尼(sorafenib)+伏立诺司他]可显著降低肿瘤的生长,肿瘤控制率为1.75。联合使用药加抗pd-1抗体医治的动物,肿瘤生长进一步明显减缓,肿瘤控制率为4.00(p<0.05),即[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]+igg后肿瘤生长547%,[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]+anti-pd-1后肿瘤生长242%。在任何医治条件下,动物体重均无明显变化。然后,我们在第24天,即停止接触任何药品/抗体后的20天,对从动物身上分离出的肿瘤进行分析。

  医治结束后20天,pan02肿瘤细胞突变的k-ras表达降低,erbb1表达降低。在先前接触[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]的肿瘤中,ido-1的表达也明显减少,而先前接触抗pd-1抗体的肿瘤中ido-1的水平延长。在所有处置条件下,erk2的总表达量保持不变。先前暴露于[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]的pan02肿瘤没有显著改变cd4+t细胞水平,而cd8+t细胞水平强烈增强,药品联合抗pd-1抗体显著延长cd8+细胞水平超过单独医治。与t细胞水平的改变相平行,[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat],正如之前在体外观察到的那样,减少了pd-l1的表达,提高了mhca的水平。生物标志物表达和免疫细胞侵袭的变化与抗pd-1抗体联合[索拉非尼(sorafenib)+伏立诺司他]的抗癌效力增强有关。

  m2极化的巨噬细胞通常产生高水平的il-10和tgf-β,低水平的il-12,而m1极化的巨噬细胞产生低水平的il-10和高水平的il-12。[索拉非尼(sorafenib)+伏立诺司他]暴露于pan02肿瘤可减少肿瘤和免疫细胞浸润中il-10和tgf的水平,并且这些效应通过加入抗pd-1抗体而得到加强。相比之下,之前的肿瘤暴露于[索拉非尼(sorafenib)+伏立诺司他]显著增强了肿瘤和免疫细胞浸润中的il-12水平。然后我们确定之前[索拉非尼(sorafenib)+伏立诺司他]暴露是否改变了内质网应激讯号和伴侣功能/表达的基础水平。分子伴侣hsp90的活性受乙酰化调节,部分受组蛋白脱乙酰酶6(hdac6)调节。预先暴露于[索拉非尼(sorafenib)+伏立诺司他]的肿瘤中,hdac6的蛋白水平减少了60%以上,eif2s51的磷酸化水平上升了40%以上。尽管eif2磷酸化增强,但grp78在接触[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]或抗pd-1抗体的肿瘤或免疫细胞中的表达并未降低。但是,在接触[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]抗pd-1抗体的肿瘤中,hsp90的表达明显降低。

  肿瘤暴露于[索拉非尼(sorafenib)+伏立诺他]延长了肿瘤内f4/80+染色细胞的水平。药品组合还延长了inos和精氨酸酶的水平,前者是m1极化标记物,后者是m2极化标记物。然而,虽然f4/80和inos共定位,表明m1巨噬细胞侵袭,f4/80和精氨酸酶没有共定位。在胰腺癌细胞内高水平的精氨酸酶表达是有毒的,是否精氨酸酶的过度表达是由于[索拉非尼(sorafenib)+伏立诺他]医治引发起的体内肿瘤细胞的杀伤需要超出本文的研究范围。虽然inos水平上升
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,但精氨酸酶水平明显低于基线水平。因此,我们的新药/抗体组合促进了肿瘤m1巨噬细胞的浸润,这进一步支持了我们的假设,[索拉非尼(sorafenib)+伏立诺司他]代表了一种新的药品组合,使“冷”的胰腺肿瘤“热”此外,观察到的细胞因子表达的变化也与药品医治的pan02肿瘤中f4/80+inos+m1巨噬细胞浸润增强的数据一致。

  预先暴露于[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]的肿瘤延长了肿瘤中心和前沿cd69+cd335+共染活性自然杀伤细胞的数量。暴露在联合药品和抗pd-1抗体的作用下,导致了肿瘤内nk细胞水平的进一步上升。我们接下来决定我们的药品组合,在有或没有抗pd-1抗体的情况下,是否改变了髓样来源抑制细胞(mdscs)的肿瘤水平。初期暴露于[索拉非尼(sorafenib)+伏立诺司他]可增强肿瘤中cd11b染色水平,但降低gr-1染色。最后,对动物血浆和肿瘤组织进行了多重抗体芯片分析。

  对于大多数细胞因子的分析,基于使用相同数量的血浆/肿瘤蛋白,组织和血浆中的细胞因子水平相似,除了在肿瘤组织中上升的il-16,ccl12和ccl3。与载体控制加igg医治的肿瘤细胞因子水平相比,接触[索拉非尼(sorafenib)+vorinostat]+anti-pd-1的肿瘤细胞cxcl-13、ccl27、cxcl-5、ccl11、kc、g-csf、gm-csf、干扰素、il-1、il-1、il-2、il-3、il-4、il-5、il-6、il-10、il-13、cxcl10、cxcl7、ccl22、ccl4、ccl5、cxcl-16、c17、ccl25和tnf水平减少。在药品暴露的肿瘤中il-12p40和il-12p70水平上升。血浆中cxcl-13、cxcl-5、il-16、ccl7、cxcl-16和cxcl-12水平上升。血浆细胞因子水平没有明显下降。[药道网]目前能够为患病者提供老挝和印度的索拉非尼(sorafenib)(多吉美(tosylate)),价钱有很大的优势,怎么选购呢?详情请扫码咨询:

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