辣椒素和索拉非尼(sorafenib)、甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib)片联合医治能够抑制肝癌-

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所属分类:疗效
摘要

研究辣椒素和索拉非尼单独及联合应用对人肝癌细胞株lm3、hep3b和huh7的影响。随着辣椒素和索拉非尼浓度的延长,这四种细胞系的存活率和增殖率减少。低浓度的辣

  目的:研究辣椒素和索拉非尼(sorafenib)单独及联合应用对人肝癌细胞株lm3、hep3b和huh7的影响。随着辣椒素和索拉非尼(sorafenib)浓度的延长,这四种细胞系的存活率和增殖率减少。低浓度的辣椒素和中等浓度的索拉非尼(sorafenib)联合应用能够大大增强对细胞存活和增殖的抑制作用。

  不同组合的辣椒素和索拉非尼(sorafenib)对lm3细胞的增殖均有不同阶段的抑制作用,在lm3细胞中,索拉非尼(sorafenib)联合辣椒素(80、100和120m)的ic50区别由3.987m降至2.989m、2.590和1.854m,在80、100和120m时,索拉非尼(sorafenib)与辣椒素有显著的协同作用。

  选择80m辣椒素和4m索拉非尼(sorafenib)的混合物进行下一系列实验。为了确定细胞凋亡的阶段,采用原位末端标记染色法检查细胞。用辣椒素和索拉非尼(sorafenib)处置后,镜检显示细胞染色,辣椒素和索拉非尼(sorafenib)联合处置可见较高数量的原膜阳性细胞。为了进一步验证辣椒素和索拉非尼(sorafenib)单独或联合应用诱导细胞凋亡的细胞凋亡,采用流式细胞仪分析方式进行细胞凋亡评价。联合医治比单一医治更能诱发细胞凋亡。如图3b所示,对照组、80m辣椒素、4m索拉非尼(sorafenib)、80m辣椒素和4m索拉非尼(sorafenib)联合医治48h后凋亡细胞百分率区别为3.43±0.536、16.58±0.629、21.18±0.809和52.13±1.602%。

  为了进一步阐明lm3细胞凋亡延长的机制,我们研究了两种关键的凋亡相关蛋白bcl2和bax的蛋白水平。联合应用辣椒素和索拉非尼(sorafenib)可上调促凋亡蛋白bax的表达,减少抗凋亡蛋白bcl2的表达。免疫印迹法也检查了caspase-3。结果表明,80m辣椒素和4m索拉非尼(sorafenib)作用24h后,caspase-3的裂解率延长。上述结果表明,辣椒素联合索拉非尼(sorafenib)可调节lm3细胞凋亡讯号通路的激活。

  为了研究辣椒素和索拉非尼(sorafenib)联合处置对细胞自噬的影响,采用免疫组织化学方式检查了自噬相关基因beclin-1、p62和lc3a/b-ii的蛋白表达情况。联合医治组与单药医治组相比,beclin-1和lc3a/b-ii水平上升。与单药医治组相比,联合医治组自噬特异性底物p62明显降低。

  辣椒素和索拉非尼(sorafenib)联合应用能显著抑制lm3细胞的侵袭和迁移细胞刮痕试验用于确定辣椒素和索拉非尼(sorafenib)是否抑制肝癌细胞的迁移。如图5a所示,联合医治后lm3无细胞区较单药医治后宽,医治组48、72h伤口较对照组宽,表明辣椒素和索拉非尼(sorafenib)协同抑制lm3细胞迁移。移行试验和基质胶侵袭试验表明,辣椒素和索拉非尼(sorafenib)均能抑制lm3细胞的迁移和侵袭,联合医治效果优于单药医治。因此,我们接下来检查e-cadherin,n-cadherin,vimentin,mmp2和mmp9在单一医治组和联合医治组的表达水平,通过西方墨点法。联合应用辣椒素和索拉非尼(sorafenib)后,lm3细胞n-cadherin、vimentin、mmp2和mmp9水平明显减少,e-cadherin水平上升。

  为了阐明辣椒素和索拉非尼(sorafenib)甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib)片协同作用的机制,我们研究了与辣椒素和索拉非尼(sorafenib)协同作用有关的pi3k/akt/mtor讯号转导。辣椒素和索拉非尼(sorafenib)联合医治可减少细胞内pi3k、p-akt、p-mtor和p-p70s6k的水平,联合医治后细胞内pi3k、p-akt、p-mtor和p-p70s6k的水平均低于单药医治组。Pi3k/akt/mtor讯号可被多种刺激激活。生长因子受体家族蛋白是pi3k/akt/mtor讯号传导的主要上游分子。许多实体肿瘤表现为egfr高表达或异常表达。Egfr与肿瘤细胞增殖、血管生成、侵袭、转移扩散和凋亡抑制有关。因此,用辣椒素、索拉非尼(sorafenib)或它们的联合医治后,检查了lm3细胞中p-egfr和egfr的
辣椒素和索拉非尼(sorafenib)、甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib)片联合医治能够抑制肝癌-
水平。辣椒素和索拉非尼(sorafenib)联合处置可使lm3细胞p-egfr和egfr水平减少,联合处置可协同减少p-egfr和egfr水平,与单一处置组相比有所下降。结果表明,辣椒素和索拉非尼(sorafenib)协同抑制egfr和pi3k/akt/mtor讯号转导。

  辣椒素和索拉非尼(sorafenib)协同抑制肝癌细胞的生长,进一步证实了辣椒素和索拉非尼(sorafenib)协同抑制肿瘤生长的作用。辣椒素和索拉非尼(sorafenib)医治从接种后第7天开始,静脉注射28天。观察到辣椒素和索拉非尼(sorafenib)联合医治对肿瘤体积有明显的抑制作用。然而,对照组和医治组的体重没有显著差异。

  此外,我们还利用免疫组织化学方式检查了异种移植瘤组织中与增殖、凋亡、自噬、侵袭和转移扩散相关的蛋白质的表达水平,并对这些蛋白质的表达水平进行了免疫组织化学分析。辣椒素、索拉非尼(sorafenib)及其联合应用抑制异种移植瘤的增殖、侵袭和转移扩散,激活细胞凋亡和自噬。Ki67和bax表明联合应用辣椒素和索拉非尼(sorafenib)(甲苯磺酸索拉非尼(sorafenib)片)医治的肿瘤中凋亡细胞增多,增殖细胞明显降低。另外,联合医治组肿瘤中p62蛋白表达水平最高。辣椒素和索拉非尼(sorafenib)减少了mmp2和mmp9在肿瘤中的表达,联合医治增强了这种效果。

  此外,在异种移植瘤中评价p-egfr和p-akt水平,观察到辣椒素和索拉非尼(sorafenib)联合应用最大阶段地减少p-egfr和p-akt水平。监控肝肾生化功能,四组间差异无统计学意义。为了进一步评价医治相关毒性,对照组和药品医治组的肝脏和肾脏进行h&e染色,显微镜下对比肝脏和肾脏的组织学结构,辣椒素、索拉非尼(sorafenib)及其联合医治未见明显组织学改变。这些结果表明,辣椒素和索拉非尼(sorafenib)联合医治能有效抑制异种肝癌的生长、侵袭和转移扩散,并具有良好的耐受性。索拉非尼(sorafenib)好多钱一瓶?能够购买到仿制药物吗?通过[药道网]能够购买到印度Natco的药物,详情请扫码咨询:

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