再使用索拉非尼(sorafenib)、多吉美(tosylate)后对酪氨酸激酶抑制作用-

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所属分类:疗效
摘要

为了确定索拉非尼是否诱导MT表达,将Huh7(人类HCC细胞系)细胞用索拉非尼处置了6和24小时,并检查了MT-1A,-1B,-1E,-1F,-1G,-1H,通

  为了确定索拉非尼(sorafenib)(多吉美(tosylate))是否诱导MT表达,将Huh7(人类HCC细胞系)细胞用索拉非尼(sorafenib)处置了6和24小时,并检查了MT-1A,-1B,-1E,-1F,-1G,-1H,通过Q-PCR分析-1M,-1X和2A。在这些MT中,MT-1G是索拉非尼(sorafenib)医治后诱导的最高基因。相反,在用其他酪氨酸激酶抑制剂医治后,Huh7细胞中MT-1G的mRNA表达未受到影响。

  一致地,蛋白质印迹分析显示,在用索拉非尼(sorafenib)而非其他酪氨酸激酶抑制剂医治后,Huh7细胞中MT-1G的蛋白水平显着上升,但MT-1A的蛋白水平却未显着上升。此外,在其他人类HCC细胞系和HCC患病者的原发肿瘤肝细胞中观察到索拉非尼(sorafenib)诱导的MT-1G蛋白表达。这些数据表明索拉非尼(sorafenib)可特异性诱导多种人类HCC细胞表达MT-1G。以前的研究表明索拉非尼(sorafenib)可调节不同转录因子的活性。影响HCC细胞的细胞去世和存活。为了确定索拉非尼(sorafenib)诱导的MT-1G表达所需的转录因子,将针对p53,HIF1α和NRF2的靶标特异性shRNA转染到Huh7和/或HepG2中。细胞。索拉非尼(sorafenib)对p53,HIF1α和NRF2的mRNA水平没有显着影响。

  有趣的是,敲低NRF2而不是p53和HIF1α能够显着抑制索拉非尼(sorafenib)诱导的MT-1G mRNA表达。作为阳性对照,敲除p53抑制了HepG2细胞中顺铂诱导的p21 mRNA表达,而敲除
再使用索拉非尼(sorafenib)、多吉美(tosylate)后对酪氨酸激酶抑制作用-
HIF1α抑制了Huh7细胞中缺氧诱导的GLUT1 mRNA表达。与我们先前的研究一致(20),索拉非尼(sorafenib)主要在蛋白质水平而非mRNA水平延长NRF2表达。敲除NRF2还抑制了索拉非尼(sorafenib)诱导的Huh7和HepG2细胞中MT-1G蛋白的表达。此外,有效的NRF2抑制剂限制了Huh7细胞中索拉非尼(sorafenib)诱导的NRF2转录活性和MT-1G表达。 PPG是胱硫醚酶的不可逆抑制剂,在以前的报道中被用来抑制MT的合成。

  PPG还抑制Huh7细胞中索拉非尼(sorafenib)诱导的NRF2转录活性和MT-1G表达。因此,这些发现表明索拉非尼(sorafenib)诱导HCC细胞中MT-1G的表达需要通过胱硫醚酶途径激活NRF2。为了确定MT-1G表达的延长是否调节索拉非尼(sorafenib)的抗肿瘤活性,两种针对MT-1G的不同shRNA转染到Huh7和HepG2细胞中。确实,RNAi抑制MT-1G表达显着增强了索拉非尼(sorafenib)诱导的48小时细胞去世,如细胞生存力测定所示。集落形成试验还表明,在索拉非尼(sorafenib)医治后,MT-1G表达的抑制抑制了长期HCC细胞的增殖。 NRF2抑制剂和PPG均可提高索拉非尼(sorafenib)诱导的HCC细胞去世。这些发现共同表明,抑制MT-1G表达可增强索拉非尼(sorafenib)在HCC细胞中的抗癌敏感性。为了确定MT-1G介导索拉非尼(sorafenib)耐受药物的基础,我们用几种有效的细胞去世抑制剂处置了MT-1G敲低的HCC细胞。在索拉非尼(sorafenib)医治后,铁质抑制因子。 ZVAD-FMK(一种凋亡抑制剂)和坏死磺酰胺(一种坏死病抑制剂)对索拉非尼(sorafenib)诱导的细胞去世没有影响。

  相反,ZVAD-FMK抑制星形孢菌素诱导的细胞凋亡刺激,而坏死磺酰胺抑制坏死性刺激(TNFα+ ZVAD-FMK)诱导的细胞去世。此外,MT-1G的敲低还增强了经典的促铁促性激素珠蛋白的诱导的细胞去世。该过程能够被ferrostatin-1和liprostatin-1(而不是ZVAD-FMK和坏死磺酰胺)逆转。这些发现表明,MT-1G是HCC细胞中肥大症的负调节剂。Ferroptosis的特征是脂质过氧化产物的积累,需要大量丰富的可利用的细胞铁。因此,我们进一步研究了MT-1G是否参与脂质过氧化和铁代谢的调节,从而导致索拉非尼(sorafenib)耐受药物。在MT-1G敲低细胞中,用蛋白素和索拉非尼(sorafenib)医治后,脂质过氧化的终产物显着延长。现如今索拉非尼(sorafenib)价钱是好多,在哪里选购?更多详情可咨询下方【微信:yaodaoyaofang】。

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