AKT讯号的激活索拉非尼(sorafenib)、索拉菲尼的医治-

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所属分类:疗效
摘要

为了更好地了解CD24是否对索拉非尼耐受药物是必需的,我们在Huh7 / SR和Hep3B / SR细胞中用小的发夹RNA(shCD24)敲除了CD24。通过w

  为了更好地了解CD24是否对索拉非尼(sorafenib)(索拉菲尼)耐受药物是必需的,我们在Huh7 / SR和Hep3B / SR细胞中用小的发夹RNA(shCD24)敲除了CD24。通过western印迹和qRT-PCR验证了击倒效率。我们调查了几种癌症相关要素。首先,在不同浓度的索拉非尼(sorafenib)处置后48h,通过CCK8分析检查细胞活力,我们发现CD24的下调可减少Huh7/SR和Hep3B / SR细胞的细胞活力,尤其是当索拉非尼(sorafenib)处置超过1.5时μM。此外,Huh7 / SR和Hep3B / SR中CD24的敲低显着减少了其恶性行为,包括增殖和索拉非尼(sorafenib)(1.5μM)医治的抗凋亡能力。

  因此,我们得出结论,CD24与索拉非尼(sorafenib)耐受药物有关。然而,为了进一步了解CD24诱导的索拉非尼(sorafenib)耐受药物机制,我们进行了全转录组shot弹枪测序(RNA-Seq),以确定Huh7 / SR和Huh7之间坚持的细胞转录组变化。 SR shCD24(用1.5μM索拉非尼(sorafenib)医治)。在所有转录本的无监督聚类分析中,我们检查到两组样品的表达特点存在显着差异。

  主成分分析(PCA)显示,当分析mRNA时,来自两组的样品显示出形成单独簇的趋势。使用差异表达的mRNA作为输入。我们发现了许多富集的途径,其中AKT/mTOR和自噬途径最为重要,但在其他地方进行了进一步研究。为证实RNA-Seq的预测,我们检查到AKT讯号的激活索拉非尼(sorafenib)的医治。

  我们发现,在Huh7 / SR细胞中,Thr308中的AKT(p-AKT)以及p-mTOR(Ser2448)的磷酸化显着减少,但在Huh7 / SR shCD24
AKT讯号的激活索拉非尼(sorafenib)、索拉菲尼的医治-
细胞中没有差异。在Hep3B / SR细胞中发现了相同的结果。这些结果可能表明CD24通过抑制AKT / mTOR讯号转导来调节索拉非尼(sorafenib)耐受药物性。我们还发现,通过RNA-seq数据,AKT的一种抑制剂PP2A显着延长,我们进一步证实了其转录和蛋白质表达。我们推测CD24通过PP2A诱导的AKT / mTOR抑制与索拉非尼(sorafenib)耐受药物相关。我们研究了PP2A抑制剂冈田酸和AKT激动剂SC79处置后细胞活力的变化。在未使用索拉非尼(sorafenib)处置的情况下,细胞活力没有显着变化,但是在Huh7 / SR和Hep3B / SR中,当抑制PP2A或增强AKT活性时,细胞活力均显着下降。我们用上述医治方式进一步分析了AKT / mTOR的激活。我们发现减少的细胞生存力与索拉非尼(sorafenib)的医治与AKT / mTOR讯号的激活有关。

  由于RNA-Seq数据也表明自噬存在显着差异,并且自噬是AKT / mTOR讯号传导的下游效应之一,因此我们继续探索自噬在CD24介导的索拉非尼(sorafenib)耐受药物中的作用。基于此假设,我们通过使用IHC染色研究了人类临床样品中的此类讯号传导,发现与索拉非尼(sorafenib)敏感的组织相比,耐索拉非尼(sorafenib)的HCC组织显示出AKT / mTOR的活化明显更低,但PP2A和LC3的表达延长-II。因此,我们着重研究CD24介导的自噬在索拉非尼(sorafenib)耐受药物中的作用。我们首先检测了Huh7/SR细胞和Huh7 / SR CD24shRNA中自噬的水平。我们发现,用1.5μm索拉非尼(sorafenib)(24 h)处置的Huh7 / SR CD24shRNA与Huh7 / SRCD24shRNA相比,LC3-II延长但p62降低。

  透射电子显微镜显示,在Huh7 / SR细胞中存在大量的自噬小体形态特点的双膜液泡结构,但在Huh7 / SR CD24shRNA细胞中不存在。通过使用RFP-GFP标签的LC3,设计了一种荧光检查方式来监控自噬体。 GFP讯号对酸性和/或蛋白水解条件敏感,而RFP更稳定。融合讯号(黄色点)表示隔室尚未与溶酶体(如吞噬细胞或自噬体)融合。在此标准下,我们发现Huh7 / SR细胞与Huh7 / SR shCD24细胞相比具有更强的自噬能力。为研究自噬对于CD24诱导的索拉非尼(sorafenib)耐受药物性进展是否必要,我们用1μnM处置了Huh7 / SR细胞。 其中。这么看来索拉非尼(sorafenib)的效果针对与肝癌非常不错,更多详情可咨询下方【微信:yaodaoyaofang】。

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