CD24依赖性索拉非尼(sorafenib)、索拉菲尼耐受药物性的影响-

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所属分类:疗效
摘要

根据转录组shot弹枪测序(RNA-Seq)的分析,我们集中于以下注释途径,包括AKT / mTOR讯号传导途径和自噬途径。许多研究明白地表明,自噬是一种介导耐

  根据转录组shot弹枪测序(RNA-Seq)的分析,我们集中于以下注释途径,包括AKT / mTOR讯号传导途径和自噬途径。许多研究明白地表明,自噬是一种介导耐受药物性的细胞保护机制。在我们目前的研究中,我们证实了患病者肝癌样本中的自噬水平很高。索拉非尼(sorafenib)(索拉菲尼)耐受药物细胞中的索拉非尼(sorafenib)医治诱导了自噬的形态和生化特点,例如自噬体的产生,RFP-GFP-LC3的重新分布和LC3-II的积累。 LC3被广泛用作隔离膜和自噬小体显微镜检查的标记物。此外,能够通过免疫印迹分析区别检查PE共轭LC3和非共轭LC3,并且LC3-II的量也广泛用于定量自噬活性。

  已经提出LC3在隔离膜的闭合中起作用。 CD24依赖性索拉非尼(sorafenib)耐受药物性的影响在用药理抑制剂或必需的自噬基因敲低自噬过程中消失或减弱。因此,CD24通过自噬激活来调节索拉非尼(sorafenib)耐受药物性。 AKT/mTOR途径是自噬激活的重要上游讯号。然而,该途径在索拉非尼(sorafenib)耐受药物细胞中存在剂量依赖性缺陷,并通过CD24敲
CD24依赖性索拉非尼(sorafenib)、索拉菲尼耐受药物性的影响-
除得以挽救,表明CD24诱导的自噬激活是通过抑制AKT/mTOR途径实现的。 Fujikuni等人和其他研究表明,低氧微环境能够诱导CD24过表达。缺氧诱导因子能够与CD24的启动子结合,从而促进胃癌细胞的侵袭和转移扩散。

  CD24有两个启动子序列,第一个来自人DNA36的混合样品,第二个来自B淋巴细胞群。因子可能与CD24的启动子结合并募集PP2A,后者驱动CD24启动子激活并在索拉非尼(sorafenib)耐受药物中表达。从RNA-Seq研究中能够看出,Huh7 / SR细胞中的蛋白质PP2A(一种多功能的AKT活性酶抑制剂)显着延长。总之,我们发现CD24在耐索拉非尼(sorafenib)的肝细胞癌肿瘤细胞中高度表达。发现CD24是通过AKT / mTOR介导的自噬调节索拉非尼(sorafenib)耐受药物所必需的功能标记。 CD24表达水平也与肝癌的进展和预后有关。所有这些发现为HCC医治提供了潜在的医治靶点。

  从2014年10月至2015年11月在南京医科大学第一附属医院肝移植中心接受肝切除术的患病者中,共获得了由肿瘤和邻近正常样本组成的70对HCC新鲜组织。70例患病者中有13例接受了肝切除索拉非尼(sorafenib)医治后因索拉非尼(sorafenib)耐受药物而进行外科手术切除。在获得我们的机构伦理委员会的批准后,本研究中的所有患病者均表示愿意在外科手术前参加本研究。收集所有新鲜组织,并在10分钟内在液氮中冷冻。所有患病者的诊疗断定均经过组织病理学证实,所有患病者的临床特点总结在补充表1中。

  本研究中使用的Huh7,Hep3B人肝癌细胞系是从KeyGen获得的。所有细胞系在含10%胎牛血清和100μU/ mL青霉素钠和50μg/ mL链霉菌素的DMEM培养基中,于37°C在含有5%CO2的潮湿空气中培养。我们建立了长期暴露于低剂量(0.625μM)的索拉非尼(sorafenib)的Huh7 / SR耐受药物和Hep3B / SR耐受药物细胞,并在很长一段时间内逐渐上升至更高剂量,直至索拉非尼(sorafenib)浓度高达10μm(临床上可高达的最高浓度),该细胞能够存活。

  根据制造商的说明,用TRIzol试剂提取新鲜组织样品和细胞的总RNA。进行qRT-PCR以评估所有相关基因的mRNA的表达水平。 GAPDH用作内部对照。将靶向CD24和ATG5的两个shRNA序列克隆到慢病毒载体GV248中以区别敲低CD24和ATG5的表达,并由同一制造商提供与人基因无序列同源性的阴性对照shRNA。根据制造商的指示,使用Lipofectamine将一微克的基因特异性或阴性对照载体以Lipofectamine的融合度,以80-90%融合度转染到六孔板的Huh7细胞中。 CD24和ATG5淘汰赛。这么看来索拉非尼(sorafenib)的效果针对肝癌非常不错,更多详情可咨询下方【微信:yaodaoyaofang】。

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