细胞裂解前索拉非尼(sorafenib)、仑伐替尼处置HCC细胞-

  • A+
所属分类:疗效
摘要

洗涤细胞并用含有蛋白酶抑制剂混合物和Halt磷酸酶抑制剂混合物的RIPA缓冲液裂解。为了检测体外对FGF讯号通路的影响,在细胞裂解之前,先用乐伐替尼,索拉非尼(

  洗涤细胞并用含有蛋白酶抑制剂混合物和Halt磷酸酶抑制剂混合物的RIPA缓冲液裂解。为了检测体外对FGF讯号通路的影响,在细胞裂解之前,先用乐伐替尼(lenvatinib)仑伐替尼,索拉非尼(sorafenib)或媒介物(DMSO)处置HCC细胞1小时。将细胞在含有0.5%BSA的培养基中饥饿过夜。与每种药品一起孵育1小时;用100毫克/mLFGF19处置5分钟;然后洗净并溶解。为了检测体内对FGF讯号通路的抑制作用,携带异种移植肿瘤的小鼠接受了乐伐替尼(lenvatinib),索拉非尼(sorafenib)或相应的媒介物的单次医治; 2小时后收集肿瘤;然后将样品均质化并裂解。

  离心清除细胞和肿瘤裂解液,在1x Laemmli样品缓冲液中变性,通过SDS-PAGE分离,并转移扩散至PVDF膜上。将膜与针对Erk1/2和p‐Erk1/2的抗体孵育推荐浓度的KLB和FRS2,β‐actin和FGF19,对条带进行可视化。将人类HCC细胞以1×103细胞/孔的量接种在96孔板上,并在37°C的5%CO2中培养。第二天,用乐伐替尼(lenvatinib),索拉非尼(sorafenib)或媒介物的1:2系列稀释液处置细胞,并培养6天。测量细胞活力,并使用GraphPad Prism测定IC50值。每个实验包含一式三份的样品,并进行了三个独立的实验。

  在最后一次给药后的第二天收集异种移植肿瘤。肿瘤片段用10%福尔马林固定并包埋在石蜡中,肿瘤片段除外,将其冷冻在OCT化合物中,组织切片用冷丙酮固定。如先前所述,用抗CD31抗体染色内皮细胞并进行微血管密度测量。简要地,用抗CD31抗体对组织切片进行染色,并使用 ScanScope扫描载玻片XT系统。手动选择了密度最高的CD31染色微血管的五个感兴趣区域(ROI,每个500×500μm),并测量了每个ROI中的微血管数量。

  Ki-67阳性细胞用抗Ki-67抗体染色,并使用Envision+单试剂进行检查。 Ki-67阳性核的百分比使用HALO软件(Indica Labs,Corrales,NM)进行定量。FGF讯号通路的激活与HCC的进展有关,并且HCC子集的增殖依赖于FGF讯号通路。由于乐伐替尼(lenvatinib)抑制FGFR,我们首先研究了乐伐替尼(lenvatinib)的抗增殖活性体外有九种HCC细胞系。 乐伐替尼(lenvatinib)对HCC细胞系Hep3B2.1-7,HuH-7和JHH-7表现出选择性和有效的抗增殖活性,IC50值区别为0.23、0.42和0.64μmol/ L。免疫印迹分析表明,FGF19,FGFR4和β-Klotho在这三种细胞系中均高表达,表明FGF19–FGFR4轴被激活,与先前的报道一致。

  乐伐替尼(lenvatinib)还显示出中度抑制作用SNU-398,Li-7和HuH-1细胞增殖的IC50值区别为1.56和2.59μmol/ L。尽管未表达FGF19蛋白,但在这些细胞中检查到了一些FGFR家族成员。由于这些细胞系对pan-FGFR抑制剂中等敏感,因此乐伐替尼(lenvati
细胞裂解前索拉非尼(sorafenib)、仑伐替尼处置HCC细胞-
nib)可能会通过靶向激活的FGF讯号通路来抑制细胞的增殖。 乐伐替尼(lenvatinib)对SK‐HEP‐1,SNU‐449或PLC/PRF/5细胞没有显示出明显的抗增殖活性,它们也对pan-FGFR抑制剂不敏感。

  作为参考,我们还检测了索拉非尼(sorafenib)在9种HCC细胞系中的抗增殖活性。索拉非尼(sorafenib)未对具有高表达的HCC细胞系表现出选择性的抗增殖活性。这些结果表明,乐伐替尼(lenvatinib)通过激活的FGF讯号通路选择性抑制HCC细胞的增殖。乐伐替尼(lenvatinib)以V型结合模式28与受体酪氨酸激酶VEGFR2结合;这可能有助于其高亲和力和对少量受体酪氨酸激酶的选择性。 乐伐替尼(lenvatinib)复合物的共晶体分析表明乐伐替尼(lenvatinib)也结合了。现如今乐伐替尼(lenvatinib)的价钱是好多?在哪里选购?更多详情可咨询下方【微信:yaodaoyaofang】。

药道网—药到病除,助力生命。汇聚全球药品资讯:CAVERTA 100 Sildenafil Citrate Tablets 西地那非枸櫞酸片劑 万艾可

  • 微信咨询
  • 这是我的微信扫一扫
  • weinxin
  • WhatsApp 沟通
  • 手机扫一扫二维码
  • weinxin

发表评论

:?: :razz: :sad: :evil: :!: :smile: :oops: :grin: :eek: :shock: :???: :cool: :lol: :mad: :twisted: :roll: :wink: :idea: :arrow: :neutral: :cry: :mrgreen: