索拉非尼(sorafenib)、索拉菲尼能够显着抑制HepG2细胞的生长-

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所属分类:疗效
摘要

从用含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂(Roche)的RIPA裂解缓冲液(CWBIO)裂解的细胞中提取总蛋白。使用二辛可宁酸测定法测量细胞裂解物的蛋白质浓度,并在上

  从用含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂(Roche)的RIPA裂解缓冲液(CWBIO)裂解的细胞中提取总蛋白。使用二辛可宁酸测定法测量细胞裂解物的蛋白质浓度,并在上样前进行平衡。通过SDS-PAGE分离出总共30μg的蛋白质,并转移扩散到聚偏二氟乙烯膜上。使用适当的抗体进行免疫印迹分析,并使用增强型化学发光检查试剂盒(Millipore)对条带进行可视化。4-6周大的雌性BALB / c无胸腺裸鼠购自中山大学实验动物中心。森大学(国内广州)。将小鼠保持在实验室中,用于特定的无病原体环境,层流气流条件,12小时明暗循环以及22°C至25°C的温度下进行动物实验。

  所有动物均可免收费用获得标准实验室小鼠食物和水。按照中山大学生命伦理学委员会的批准进行动物实验,并按照既定的指南原则进行动物实验。为研究HCC细胞中TNF-α的生物学特性,我们用特异的shRNA敲低了SK中TNF-α的表达。 -HEP-1,我们加入40ng / mLTNF-α刺激HepG2细胞。结果表明,TNF-α刺激能够促进HCC细胞的增殖和迁移能力,而SK-HEP-1细胞中TNF-α的下调显着减少了HCC细胞的增殖和迁移。此外,当我们在SK-HEP-1-shTNF-α中添加外源性TNF-α时,其增殖和迁移能力得以恢复。为了确定TNF-α在介导HCC中索拉非尼(sorafenib)耐受药物性中的作用,我们用不同剂量的索拉非尼(sorafenib)处置HCC细胞48小时。 HepG2和SK-HEP-1细胞的IC50值区别为6.20μmol/L和12.83μmol/ L。但是,用TNF-α预处置的HepG2细胞的IC50值为8.12μmol/ L,而SK-HEP-1-shTNF-α细胞的IC50值为7.32μmol/ L。

  
索拉非尼(sorafenib)、索拉菲尼能够显着抑制HepG2细胞的生长-
此外,增殖试验表明,索拉非尼(sorafenib)(索拉菲尼)剂量为6μmol/ L能够显着抑制HepG2细胞的生长,但是当用TNF-α刺激预处置HepG2细胞时,抑制效率大大减少。然而,索拉非尼(sorafenib)仅显示出对SK-HEP-1细胞生长的轻度抑制,而它却明显抑制了SK-HEP-1-shTNF-α细胞的增殖能力。已经暗示EMT和索拉非尼(sorafenib)耐受药物之间存在关联,并且大量证据表明TNF-α能够在不同的癌细胞中诱导EMT 。我们的结果还表明,TNF-α诱导了HCC细胞EMT标志物的典型变化。我们探索了索拉非尼(sorafenib)对EMT的作用,我们发现索拉非尼(sorafenib)降低了HepG2细胞中的蜗牛和波形蛋白,并提高了E-钙粘着蛋白。但是,当将TNF-α预添加到HepG2细胞中时,索拉非尼(sorafenib)逆转EMT的作用减少了。值得注意的是,我们的结果表明,索拉非尼(sorafenib)对存在或不存在TNF-α的SK-HEP-1细胞中的EMT几乎没有影响。

  此外,当用3、6和12μmol/L浓度的索拉非尼(sorafenib)处置HCC细胞时,我们发现索拉非尼(sorafenib)对两种HCC细胞系中的TNF-α表达几乎没有影响。用于医治炎症相关疾病。先前的研究表明,乌司他丁抑制巨噬细胞和乳腺癌细胞中TNF-α的产生。在当前的研究中,肝癌细胞以不同浓度的乌司他丁培养48小时。蛋白质印迹结果表明,乌司他丁以剂量依赖性方法下调TNF-α表达。 ELISA法检查TNF-α表明,乌拉他汀800和1600U/mL可显着减少HCC细胞上清液中TNF-α的水平,而索拉非尼(sorafenib)浓度为6和12μmol/ L时对TNF-α的分泌几乎没有影响。

  我们进一步检测了乌司他丁对逆转HCC细胞EMT的作用。结果显示,当乌司他丁的浓度超过1600U/mL时,两种HCC细胞系中的上皮标记E-钙黏着蛋白均显着上调,而间充质标记则显着下调。此外,当我们使用浓度为1600U / mL的乌司他丁来下调HepG2和SK-HEP-1细胞中的TNF-α时,蛋白质印迹结果表明索拉非尼(sorafenib)显着抑制了两种HCC细胞系中的EMT。由于我们显示了乌司他丁对TNF-α的下调可促进索拉非尼(sorafenib)抑制HCC细胞中的EMT,因此我们推测。现如今索拉非尼(sorafenib)的效果也是非常不错的,更多详情可咨询下方【微信:yaodaoyaofang】。

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